鎳Ni柱是大家在蛋白純化中，應(yīng)用較多的一種純化柱料，屬于固定化金屬離子親和色譜中的一種，1975年由Porath等發(fā)明，其間不斷完善發(fā)展至今。
原理：過(guò)渡金屬通過(guò)與電子供體配基上，能與金屬離子相互作用的羧基或氨基的電負(fù)性元素（O，N），形成較穩(wěn)定的金屬螯合物。
在IMAC中，一個(gè)Ni2+有六個(gè)配位位點(diǎn)，被含有3，4或5個(gè)電子供體基團(tuán)（配位位點(diǎn)）的螯合物固定在吸附劑上，而剩下未被占據(jù)的位點(diǎn)暴露于溶液中，能與組氨酸，半胱氨酸，和色氨酸的側(cè)鏈或組氨酸標(biāo)簽的蛋白特異性結(jié)合。
鎳Ni柱的使用與保養(yǎng)
鎳Ni柱的洗脫通常采用競(jìng)爭(zhēng)洗脫，先用低濃度的咪唑?qū)㈦s蛋白和結(jié)合不牢的蛋白洗去，再用合適的濃度將目的蛋白洗脫。洗脫的先后順序與蛋白的結(jié)合能力相關(guān)。
1、對(duì)于一般的預(yù)裝柱，上樣前，樣品需要使用0.22μm/0.45μm濾膜進(jìn)行過(guò)濾或者離心處理，以避免樣品中有細(xì)胞碎片等固體物質(zhì)，堵塞柱子。
2、如果細(xì)胞裂解后非常粘稠，需考慮是否因?yàn)镈NA、RNA這類(lèi)核酸物質(zhì)過(guò)多，需要加入核酸酶去除，以降低樣品粘稠度，提高上樣速度及洗脫效果。
3、柱子使用過(guò)程中，不能超過(guò)填料的壓力，以免填料被壓塌。
4、每次使用后，可使用5-10倍柱體積的純水或者結(jié)合緩沖溶液對(duì)柱子進(jìn)行清洗。（如果出現(xiàn)載量嚴(yán)重下降或者壓力增加，需考慮徹底清洗）
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更新時(shí)間：2023-03-02
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